Práctica XL Determinación del tiempo de protrombina TP

 fundamento

para construir una curva de actividad de la protrombina se prepara una batería de direcciones a partir de un plasma control normal y se mide el PP del plasma control normal no diluido y de cada una de las dilucionos preparadas
tras ello se asigna el cien por cien de actividad al número de segundos medidos en la determinación del PP del plasma control normalde ac y se calcula el porcentaje que proporcionalmente les corresponde a los valores de TP determinados en cada una de las diluciones de este

con todos estos datos se traza una curva de calibrado curva de actividad de la protrombina anotando en el eje de coordenadas el vertical los valores en segundos del PP del plasma control no diluido y de cada una de sus direcciones y  en el eje de abscisas el horizontal el porcentaje de actividad asignado a cada uno de ellos

material necesario

8 tubos de ensayo de plástico.
un rotulador de vidrio de punta fina
una pre pipeta de seguridad
una pipeta graduada de vidrio de un mililitro de capacidad de dispensación
una pipeta automática capaz de dispensar 100 y 200 ul
siete puntas de pipeta automática adecuadas para contener 100 y 200ul
5 cubetas de coágulometro
cinco trocitos de acero especiales para depositar en el interior de las cubetas
un coágulometro
un baño de agua ajustable a 37 grados
un bolígrafo
una regla
una hoja de papel milimetrado también se puede utilizar un papel gráfico especial
una gradilla

reactivos

solución salina al 0,85 por ciento
una tromboplastina cálcica

un pool de plasmas normales o un plasma control normal
los tubos han de ser rotulados con la cuantía de la dilución que contienen o con el porcentaje de actividad asignado a cada dilucion

Técnica

1 homogeneizar la tromboplastina cálcico y las diluciones de plasma sin agitar las bruscamente
2 depositar el volumen total de tromboplastina calcica que se va a necesitar en un tubo de ensayo de plástico adecuadamente rotulado
3 atemperar la tromboplastina calcica a 37 grados para ello se sitúa el tubo que contiene esta sustancia en un baño de agua ajustado 37 grados entre 5 y 15minutos .
4 introducir un trocito de acero apropiado en 5 cubetas de coagulometro
6 rotular el extremo superior de una cubeta con el porcentaje de actividad de 100l otra con el 50 y el de otra con el 23 y el de otra con el 25 y el de otra con el de
10

verter 100ul de plasma puro y de cada una de sustituciones en el interior de las cubetas rotulada con el porcentaje de actividad que les corresponde
 7 incubar el plasma contenido en cada cubeta a 37 grados entre 5 y 3 minutos para ello pueden depositar se las cubetas en la placa calefactora del coagulometro

8 colocar sucesivamente cada una de las 5 cubeta en la cena de medida del coagulometro y agregar 200ul de tromboplastina cálcica
al agregar la tromboplastinaal agreg se pone en marcha el magneto agitador del coagulometro y comienza la lectura de este
cuando se forma el coágulo en el conometro finaliza la lectura y nos ofrece su pantalla el tiempo transcurrido desde la adicción de la tromboplastina cálcica.

lectura de resultados

el tp es el tiempo transcurrido desde la adicción de la tromboplastina calcica hasta la formación del coágulo de fibrina

lo más correcto es determinar tres veces el TP el plasma control puro y de cada una de sus diluciones y dar como resultado final la cifra media calculada a partir de cada trío de valores

para construir la curva de actividad de la protrombina hay que trazar una curva de calibrado o de referencia en un papel milimetrado para ello se notan en el eje de coordenadas o de las y el vertical los valores en segundos DTP del plasma control no diluido y de cada una de sustituciones y en el eje de las abscisas dónde las X el horizontal el porcentaje de actividad asignado a cada uno de ellos

posteriormente se señalan en la gráfica los puntos en que confluyen cada uno de los valores de Pepe con su porcentaje de actividad correspondiente finalmente se dibujó en la línea que mejor 125. La gráfica se te hace un papel milimetrado normal se obtiene una curva