XXV Prueba de la sacarosa

Fundamento

Esta práctica se realiza para determinar si el paciente tiene HPN o no. Y en caso de tener, la prueba será positiva, de lo contrario, negativa. El grado de positividad oscila entre un 80-100%

Material necesario

Pipetas Pasteur
Pipetas de vidrio de 5 ml y de 2 ml
Puntas de mircropipeta
micropipeta
Un reloj
Centrífuga
Cubetas de espectrofotómetro
Rotulador de vidrio
Gradilla
Papel parafilm

Muestra

Sangre venosa total

Reactivos

Solución acuosa de sacarosa
Solución acuosa de amoniaco
Suero salino


Técnica

Rotuladmos dos tubos de vidrio con las iniciales de SF Y otro con SP.
En el tubo de SF depositamos con una pipeta de vidrio 1,8 ml de suero y con una micropipeta de 200 microlitros depositamos dicha cantidad de sangre.
En el tubo SP depositamos con una pipeta de vidrio 1,8 ml de sacarosa y con una micropipeta de 200 microlitros depositamos dicha cantidad de sangre.
Aguitamos la muestra suavemente, la tapamos y dejamos reposar durante 30 minutos. Pasado este tiempo centrifugamos los tubos a 2000 rpm durante cinco minutos.
Mientras se centrifuga preparamos tres tubos, de los cuales los identificamos con las iniciales de  TB, TPr y Tpa.
A cada uno de ellos se le añade 5ml de amoniaco.
Al sacar los tubos anteriores de la centrífuga extraemos el sobrenadante 300 microlitros del mismo y lo depositamos en tubo TPr
Al tubo SF se resuspende y extraemos del mismo 300 microlitros y lo depositamos en el tubo TPa.

Una vez tenemos nuestros tres tubos finales preparados medimos su absorbancia.
Para ello depositamos una pequeña cantidad de los mismos en cubetas especiales para espectrofotómetro con ayuda de una pipeta pasteur. Ha de ser una pipeta diferente para cada mezcla.
Una vez medidos, anotamos absorbancias y realizamos la fórmula que determina el porcentaje.

Lectura de los resutados

TUBO TB 0 absorbancia
TUBO Tpa  0,206  absorbancia
TUBO Tpr  0,065 absorbancia

Fórmula es:  % hemólisis = A / AM X 100
A absorbancia de tubo TPr
AM absorbancia de tubo TPa

% hemólisis = 0,065/ 0,206 x 100= 31,55%


Hoja de trabajo

1º ¿ Con qué solución se hemolizan los hematies vertidos en el tubo problema?
Con solución sacarosa
2º ¿ A qué concentración se prepara la solución de sacarosa?
9,24%
3º ¿ Cómo se llama también la sacarosa?
azúcar común
4º ¿ Qué es el ACD?
Ácido Cítrico-dextrosa
5º ¿ Cómo se prepara el tubo blanco?
Con 5ml de amoniaco junto con 300 microlitros de suero
6º ¿ Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, con la prueba de la sacarosa, en la sangre de la HPN?
10-80%