XXIV Estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes

Fundamento

Esta prácitca se realiza para poner a los hematíes frente a un medio hipotónico y comprobar su capacidad de resistencia osmótica frente al mismo. Los hematíes son capaces de resistir hasta un 70% como máximo sin hemolizarse.

Material necesario

8 tubos de ensayo
Gradilla
Rotulador de vidrio
Cubeta de espectrofotómetro
Espectrofotómetro
Vaso de precipitado
Pipeta Pasteur
Reloj
Papel Parafilm
Centrífuga


Muestra

Sangre venosa total

Reactivos

Agua destilada
Suero salino

Técnica

Rotulamos 6 tubos de ensayo con las indicaciones de:
 1, 2, 3, ,16, 17 y 18.
Añadimos a cada uno de los tubos enumerados una gota de sangre de la contenida en dicho tubo con una pipeta pasteur.
Despúes, añadimos gotas de agua destilada a cada tubo. La cantidad de gotas es una menos al número indicado, es decir, al tubo numero 1 no se añaden, al tubo numero 2 se añade una gota, al tubo numero 3 dos gotas, y asi respectivamente con todos.
Después, añadimos gotas de suero salino, el número de gotas es de 18 al primero, 17 al segundo, 16 al tercero, 15 al cuarto, 4 al tubo quince, 3 al tubo 16, 2 al tubo 17 y 1 gota al tubo 18.
A continuación tapamos los tubos con papel parafilm y los dejamos reposar durante 30 minutos.
Transcurrido dicho tiempo centrifugamos los tubos a 2000 rmp durante 5 minutos.
Una vez centrifugado medimos absorbancia de cada tubo.
El tubo numero 1 tiene cero porciento de hemólisis, por tanto, será nuestra línea de base,
Para ello, utilizamos una cubeta, en la cual vamos depositando la cantidad de cada tubo en orden de identificación.


Lectura de resultados

Las absorbancias obtenidas son las siguientes:

TUBO 1
TUBO 2
TUBO 3
TUBO 16
TUBO 17
TUBO 18

Ahora realizamos la fórmula para determinar el porcentaje de hemólisis

% hemólisis = A/AM X 100
A  equivale a absorbancia de cada tubo
AM equivale a absorbancia de último tubo ya que es el 100% de hemólisis.


TUBO 1   =         /    X 100
TUBO 2  =          /        X 100
TUBO 3   =          /        X 100
TUBO 16  =          /        X 100
TUBO 17 =           /         X 100
TUBO 18  =           /        X 100