PRACTICA XVII : Determninación de hemoglobina en sangre ( 19 - 01 - 15 )

Fundamento

• Se basa en la transformación de hemoglobina en cianmetahemoglbina mediante los siguientes pasos :

En primer lugar el Fe 2+ de la hemoglobina , en presencia de ferricianuro potásico , se oxida a Fe3+ , dando lugar a metahemoglobina.

Posteriormente , y en presencia de cianuro potásico , la metahemoglobina pasa a cianmetahemoglobina.
Éste es un compuesto estable , de color rojo , con un pico de absorcion maximo a 540 y cuya concentracion puede ser determinada por métodos colorimétricos empleando un patrón de concentración conocida.


Material necesario

• Tubos de ensayo 
• Pipetas de seguridad 
• Espectofotómetro
• Cubetas para colorimetria

Reactivos

• Reactivo de Drabkin
• Estándar equivalente a 20g de hemoglobina / dl 

Muestra


Sangre capilar o venosa anticoagulada con EDTA , heparina u oxalato .


Técnica

• Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada
• Hay dos métodos de hacerlo , pero nosotros vamos a utilizar el método micro .

• Preparamos 4 tubs rotulados como blanco (B) , Patrón (P) , m1 y m2
• Tendremos gran precaución al pipetear reactivo de Drabkin , ya que contiene cianuro potásico y es muy tóxico.

• Añadimos 2,5 ml de Drabkin a los 4 tubos ,  a todos   
• añadimos 10 ul  de ptrón (calibrador) bote marrón pequeño a  : m1   ,  m2 y   patrón 

• Mezclamos bien y dejamos incubar a temperatura ambiente 10min .
• El tubo BR es el blanco de ractivos , porque el reactivo de Drabkin es de color amarillo , y aunque en condiciones normales su absorbancia debe ser cero , nos aseguramos de no incluir errores en la técnica y hacemos la lectura del problema frente a el .

• El tubo PR es el problema , y contiene la muestra y el reactivo de Drabkin , el color es estable durante 8 horas.
• El estándar se lee directamente , sin mezclar con reactivos , ya que está preparado como cianmetahemoglobina equivalente a una concentración de HB de 20g/dl.
• Dado que no precisa manipulación y que es estable en condiciones de conservación adecuadas , no es necesario medir su absorbancia. ( D: 0 ). En cada determinación .
• Bastará con hacer una lectura diaria e inlcuir este dato en determinaciones posteriores ( D.0ST)

 Lectura de resultados 

• Se echa el contenido de los tubos en las cubetas de espectofometría y se hace la lectura a 540 nm. 

Cálculos




D.O PR
-----------     X 20 = g de hemoglobina / dl
D.O ST



Interpretación clínica de los resultados

• Los valores normales son :
• Hombres : 14-18 g/dl
• Mujeres : 11-16 g / dl
• Niños : 10 -14 g / dl

En este caso es preferible hablar de valores de referencia, ya que existen valores notables entre zonas gográficas y grupos étnicos donde existen ciertas anemias carenciales que afectan a un número elevado de la población .


Hoja de trabajo


¿ En qué se basan los métodos de determinación de la hemoglobina?

Se basa en la transformación de hemoglobina en  cianmetahemoglbina

¿Cuál es el método recomendado por el comité internacional para la estandarización de la hematología?

 cianmetahemoglbina

¿D e dónde procede el 20 de la fórmula para calcular la concentración ? 

 procede del estándar que se lee directamente , sin mezclar con reactivos , ya que está preparado como cianmetahemoglobina equivalente a una concentración de HB de 20g/dl.