PRACTICA XXXIV : Recuento de plaquetas en frotis sanguíneo ()

Introducción 

• El recuento de plaquetas consiste en la determinación del número de trombocitos presentes en un volumen determinado de sangre , generalmente 1.mm3 .
• El recuento de plaquetas puede ralizarse contando los trombocitos presentes en varios campos de una extensión sanguínea observada microscopicamente .

         Sin embargo , también se puede llevar a cabo un recuento de plaquetas más exacto con una cámara    de recuento  o contadores electrónicos de células .

• El recuento de plaquetas practicado mediante el examen de un frotis , pemite además el estudio de la morfología de los trombocitos.

 

Material necesario

• Un microscopio
• Papel
• Un bolígrafo

Reactivos

• Líquido de inmersión
•  Panóptico rápido

Muestra

• Una extensión de la sangre problema coloreada con un método de tinción tradicional

             

Técnica

1. Observasr el frotis con el objetivo de inmersión ( aceite de inmersión ) .
2. Elegir para su examen , una zona de la preparación sanguínea en la que las células no estén superpuestas y en la que se conserva la morfología de las mismas.
3. Contar el número de plaquetas presentes en 10 campos microscópicos .
4. Para cambiar el campo correctamente y evitar contar los mismos trombocitos , se fija la mirada en un punto de cada uno de los bordes del campo microscópico que se está estudiando ( por ejemplo , el borde derecho ) y se desliza el portaobjetos hasta que ese punto está en el borde opuesto de un nuevo campo microscópico . ( en este caso , en el borde izquierdo ) .
5. Calcular la cifra media del número plaquetas contadas en los 10 campos microscópicos .

 

Lectura de resultados 

• Para cuantificar , de una forma aproximada ,  el número de trombocitos comprendidos en un mm3 de sangre , se aplica la siguiente fórmula . 

                                           PLT / mm3 = PLT /C x 20 000

PLT /mm3 = Número de plaquetas por mm3 de sangre .
PLT/C = Media del número de plaquetas contadas en varios campos microscópicos ( 10 campos ).












Interpretación Clínica de los resultados obtenidos


Cuando se observa una extensión sanguínea con el objetivo de inmersión , en condiciones normales , debe haber 1 plaqueta por cada 10-20 hematíes .
Esto equivale , aproximadamente , a la presencia , en una zona del frotis donde los eritrocitos no están superpuestos , de 5 a 25 trombicitos por campo.
Cuando el número de plaquetas por mm3 de sangre es inferior a 130 000 , se dice que hay   una trombocitopenia . o plaquetopenia , y cuando es superior 400 000 , se dice que hay una trombocitosis .


 


Hoja de trabajo

• En condiciones normales ,  ¿ cuántas plaquetas por campo microscópico hay en una zona de un frotis sanguíneo donde los eritrocitos no están superpuestos ?
• Debe haber una plaqueta por cada 10-20 hematíes 

Resultados obtenidos

• Número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos
• 195 plaquetas
• Media del número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos (PLT / C ) 
• 195 : 10 = 19´5 
• Número de plaquetas por mm3de sangre ( PLT / mm3 ) 
• 19´5 x 390 000

Valoración de resultados

• El PLT/  mm3 de sangre implica que el sujeto tiene :
• Un número de plaquetas normal

NOTA : 

1. campo = 17
2. campo = 19
3. campo = 22
4. campo = 18
5. campo = 24
6. campo = 20
7. campo = 27
8. campo = 20
9. campo = 15
10. campo = 15 

----------------------------
195 / C =                 195 /10 = 19´5                 19´5 x 20 000 =             390 000 plaquetas
 
 


 

PRACTICA XXIX : Determinación del índice de lobularidad ()

Material necesario

• Un microscopio
• Un bolígrafo
• Un papel

Reactivos

 

• Una extensión sanguínea muy fina  
• Panóptico rápido
• Agua destilada

Técnica

1. Enfocar la extensión sanguínea con el objetivo de inmersión . ( aceite de  inmersión ) .
2. Observar los neutrófilos y contar sus lobulaciones .
3. Se considera que hay un lóbulo cuando una parte del núcleo está unida al resto solamente por un fino hilo de cromatina.
4. terminar el recuento cuando se hayan observado al menos 100 neutrófilos

 

Lectura de resultados

• Una vez clasificados los neutrófilos , se cuantifican las lobulaciones presentes en ellos , y seguidamente , se calcula el IL ( índice de lobularidad ) , mediante la siguiente fórmula : 

                NL      (número de lóbulos )
     IL = --------------
              NN       ( número de neutrófilos contados ej 100)

 


Interpretación clínica de los resultados

• La desviación a la izquierda puede acompañarse de neutrofilia o de neutropenia.
• La desviación a la izquierda con neutrofilia es tipica de muchas infecciones agudas ( apendicitis , sepsis ) .
• La desviación a la izquierda con neutropenia es caracteristica de otras infecciones ( fiebre, ...)
• La desviación a la derecha puede darse en varios procesos patológicos , entre los que destacan las anemias megaloblásticas.

 

• vn ( valor normal ) 1,9 y 3 
• -1,9  desviación a la izq.
• +3  desviación a la dcha.  

Hoja de trabajo

1. ¿Cuántos tipos de neutrófilos hay según Arneth ?
2. 5 tipos
3. ¿Qué tipo de desviación hay si el IL es de 2,5 ?
4. Ninguno es normal ( entre 1,9 y 3 )
5. ¿ De qué enfermedad es típica la desviación a la izquierda con neutrofilia ?
6. de infecciones agudas ( sepsis , apendicitis )   

 

PRACTICA XIII : Recuento de hematíes RBC ( )

Fundamento

• Para el recuento en cámara de glóbulos rojos , se diluye la sangre problema en un líquido apropiado y posteriormente se deposita en la cámara de recuento , donde se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de los retículos 

 

Material necesario

• Una pipeta diluidora de thoma , para recuentom de glóbulos rojos 
• Un tubo de goma con boquilla , adaptable a la pipeta diluidora
• Una cámara de recuento con un retículo de nevauer mejorado
• Un cubre
• Un microscopio 

  Reactivos

•  Líquido de dilución . Este debe ser isotónico con el plasma , para evitar la alteración morfológica e incluso de lisis de hematies .
• El más utilizado es el de Hayem .

 

Muestra 

• Sangre capilar o venosa anticoagulada.

 

Técnica

1. Situar sobre el retículo de la cámara un cubre, humedeciendo la cámara previamente.
2. Aspirar la sangre hasta la señal de 1 
3. Limpiar la pipeta con gasas sin que baje el nivel de la sangre .
4. Aspirar el líquido diluyente hasta la señal de 101
5. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el contenido del bulbo. Para ello se sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e indice , y se agita suavemente en sentido horizontal 2-3 min.
6. Desechar las 3 primeras gotas .
7. Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre. Se pone una gota por el extremo de la cámara y se deja que suba por capilaridad , evitando que el líquido desborde por el cubre.
8. Dejar reposar la sangre diluida , contenida en la cámara .
9. Enfocar el retículo con el objetivo de 40x y con el condensador a baja altura y ver que la distribución de los hematíes es homogénea.
10. Contar los hematíes presentes en los 4 cuadrados grandes de las esquinas y en el del centro.
11. Al contar tendremos en cuenta los que estén en los bordes arriba y a la derecha. y en zig zag.

 

Lectura de resultados 

• Como se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados medianos del cuadrado grande central , y éste tiene 25 cuadrados medianos , hay que multiplicar por 5 , la cifra obtenida en el recuento , para calcular el número de hematíes que hay en cuadrado grande .

• Como la longitud de cada uno de los lados  del cuadrado grande  central es de 1mmy la longitud del espacio comprendido entre éste y el cubre es de 0,1mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior , para saber el numero de hematíes existentes , no en 0,1 mm3 si no en 1mm3.

•  Como la sangre , previamente al recuento propiamente dicho se diluye, hay que multiplicar el resultado anterior por 100 , si se ha partido de sangre entera contenida hasta el enrase de 1 , o por 200 , si se ha partido de la sangre entera contenida hasta el enrase de 0,5 ( para calcular las diluciones realizadas no se tienen en cuenta el líquido contenido en el tubo capilar largo de la pipeta diluidora , pues se considera , que éste no se mezcla con el resto a nivel del bulbo .

 

FORMULA : 

• RBC = H x 5 x 10 x D

RBC = recuento de hematíes ( nº de hematíes por mm3 de sangre )     

          H = hematíes contados en 5 cuadrados medianos
     
          D = factor de dilución ( 100 ó 200 )




Interpretación clínica de los resultados obtenidos

• La disminución del RBC ( glóbulos rojos ) se produce en las anemias y su aumento se da en las policitemias .    

• Se considera normal   un RBC comprendido entre los 4 y los 5,5 millones / mm3 en mujeres 
•  y entre los 4,5 y los 6 millones /mm3 en hombres

Hoja de trabajo

•  ¿ Qué se debe hacer si el liquido de Hayem contiene precipitados ?
• Filtrarlo
• ¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados pequeños donde se han contado los hematíes ?
•   0,0625  x 0,0625 x 0,1 = 3,90625 x (10elevado -3 )
• ¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados medianos donde se han contado los hematíes ?
• 0,25 x 0,25 x 0,1 = 6,25 x (10elevado3 mm3)
• ¿Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre el cuadrado grande central ?
• 1 x 1 x 0,1 = 0,1 mm3
• Si la pipeta de Thoma se enrasa con sangre hasta la señal de 1 ¿ Cuál es la dilución posteriormente obtenida ?
• 1 : 100
•    Si la sangre se diluye a 1 / 200 y se cuentan 450 hemtíes en 5 cuadrados medianos ¿ Cuál es el RBC obtenido ?
• RBC = H x 5 x 10 x D = 450 x 5 x 10 x 200 = 450 000

Resultados obtenidos

• Hematíes contados en 5 cuadrados medianos ----- 763
• Factor de dilución --------------------------------- 1 : 100
• RBC-----------------------------------------------3 815 000 hematíes / mm3

      Valoración de resultados 

• sexo    masculino
• RBC   Alto