- Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa .
- Microscopio óptico.
- Portas limpios.
- Cristalizador.
- Puentes de tinción.
- Pipetas pasteur con chupete.
- Tubos de ensayo.
- Colorante Giemsa.
- Solución tampón pH 7,2 .
- Metanol.
- Aceite de inmersión.
Muestra
- Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada . El anticoagulante de elección es la heparina o el EDTA , ya que el citráto sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas.
- Preparamos un frotis o extensión sanguínea , según la práctica VII .
- Colocamos el frotis sobre el puente de tinción , en el cristalizador y en posición horizontal .
- Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos . Escurrimos y dejamos secar al aire con esto se fija el frotis.
- Diluimos en un tubo de ensallo 0,2 ml. de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2 ml. de solución tampón pH 7,2. Es importante realizar esta dilución en el momento de la tinción ya que el colorante precipita y no es válido para otro día .
- Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la dilución de colorante , dejándolo actuar durante 25 min.
- Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Posteriormente lavamos con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos de colorante. Dejamos escurrir en posición vertical.
- Una vez seca la tinción , echamos una gota de aceite de inmersión y examinamos al microscopio óptico con el objetivo de 100x.
- Los eritrocitos se tiñen de color rosa y las plaquetas de violeta.
- Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de color violeta rojizo.
- Los eosinófilos se observan con el núcleo azul violeta , el citoplasma azul y los gránulos de color rojo anaranjado.
- Los basófilos presentan un núcleo de color púrpura y granulazión de color oscuro .
- Los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo color violeta y el citoplasma azul.
Hoja de trabajo
- ¿ Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica ?
- Heparina y EDTA.
- ¿ Con qué reactivo fijamos el frotis ?
- Metanol.
- ¿ Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis ?
