PRACTICA XVI : Contaje de reticulocitos ( 27 - 11 - 14 )

Fundamento

• Podemos observar los reticulocitos a través del microscopio , utilizando la tinción de colorantes vitales ( azul de metileno nuevo o azul cresil brillante , este último es el que utilizamos nosotros ) .
• Estos colorantes tiñen los restos de ARN ( ácido ribonucleico) , que lo entiendo como restos de material genético. 
• Los hilos o fibras teñidos de azul , se presentarán como un conjunto de hilos o fibras que, dependiendo del grado de madurez del eritrocito , será mas compacto ( forma de oviilo ) , cuando la célula aún es joven ( grado I ) .
• Ese ovillo ira decreciendo conforme va madurando o envejeciendo la célula.
• Hasta que ya no tenga nada de ARN , que será en el final del ( grado IV) .
• El proceso de maduración va del grado I , al IV de forma continuada . 

       


Material necesario

•  Microscopio
• Tubos de hemólisis
• Pipetas pasteur
• Portas
• Baño de agua
• Embudo y papel de filtro

                                                                               

Reactivos

• Azul cresil brillante en polvo 
• Solución salina al 0,9 %
• Citrato sódico al 3 % ( 3 gr en 100 ml )
• Agua destilada
• Aceite de inmersión

Muestra

• Sangre anticoagulada con EDTA .

•  Porque los reticulocitos también maduran in vitro .

 

• Técnica

1.  Preparación del colorante :
2. Mezclamos 80 ml de solución salina y 20 ml de citrato sódico al 3 %
3. Pesamos un gramo de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior ( azul de metileno )
4. Filtramos antes de usarlo 

•  Tinción de los reticulocitos

1. Es una tinción supravital , se hace mientras las células aún estan vivas
2. Para ello echamos 3 gotas de la solución colorante ( sin alterar ) en un tubo de hemólisis y otras 3 gotas de sangre total previamente homogeneizada 
3. mezclamos suavemente con papel parafilm e introducimos en el baño de agua a 37ºC durante 5min
4.  Pasado este tiempo volvemos a homogeneizar y tomamos una gota de la suspensión para depositarla en un porta
5. Por último hacemos una extensión o frotis y dejamos secar para verla posteriormente con aceite de inmersión , y como no esta fijada se utiliza un cubre .

 

Lectura de resultados 

• Observamos la muestra con el objetivo de 100 ( inmersión )
• Los hematíes se habrán teñido de un color verde amarillento y los reticulocitos presentaran unas fibras azules en su interior
• Se deben hacer dos extensiones para hacer el recuento de las dos y para que sea válido la diferencia entre ambas tiene que ser menor de 5 reticulocitos . 
• El resultado final es la media de ambos. 

Interpretación clínica de los resultados obtenidos ( fórmulas ) 

                                                 nº de reticulocitos contados

•  % de reticulocitos = ------------------------  x 100

                                                nº de hematíes contados

•  Se compensa la falta de glóbulos rojos o hematíes , aumentando el nº de reticulocitos

•  En adultos y niños los valores normales están entre 0,5% y 1,5%

   +++++++++++++ 0,5% y 1,5%+++++++++++++

                                                                                                   HTC.paciente

•  % de reticulocitos corregido = % de reticulocitos X -----------------------

                                                                                                HCT. normal

• Las anemias intensas alteran los valores normales  aumentendo el nº de reticulocitos

                     %  de reticulocitos corregido

•  IPR = ---------------------------------------

                  días de maduración en sangre periférica

               

• IPR ----- ALTO = ES UN VALOR  POR ENCIMA DE LO NORMAL (3) INDICA ALTA ACTIVIDAD HEMATOPOYÉTICA QUE DE COSTUMBRE

•  IPR--------BAJO = MENOS DE 2, INDICA UNA ESCASA ACTIVIDAD ERITROPOYÉTICA ,MENOS QUE DE COSTUMBRE

Hoja de trabajo

• ¿ Qué son los reticulocitos ?-

Son glóbulos rojos inmaduros , que aun contienen material genético ARN

•  ¿ Qué tipo de tinción estamos utilizando ?

Una tinción supravital

•  ¿Por qué hacemos la técnica de corrección de reticulocitos ?

Cuando existe una anemia,  se compensa la falta de hematíes con un aumento de reticulocitos por eso debemos corregir su valor en tanto por ciento ( %) para poder considerarlo real .

• ¿ Qué nos expresa el IPR ?

Nos da un valor numérico de la estimulación hematopoyética , puede ser normal , alto (+·3) , o bajo ( -2) .