PRACTICA XIV : Determinación del valor hematocrito mediante el micrométodo ()

Fundamento

• El HCT puede determinarse por métodos manuales o por métodos automáticos .   Los métodos manuales consisten en la centrifugación de la sangre , aplicandole una fuerza de 2000 a 5000 g ( 3500rpm unos 10 min.).

         Los métodos automáticos pueden basarse en dos métodos :

• El cálculo matemático del HCT a partir de valores de RBC ( recuento de hematíes ) y de volumen corpuscular medio , obtenido electronicamente con anterioridad.
• El análisisde la sombra que produce la población eritrocitaria , al reflejarse en un campo oscuro.
• Con los métodos manuales también se cuentan , junto con el volumen de los hematíes y el del plasma que queda atrapado entre los hematíes . Por eso , el valor de HCT conseguido con métodos automáticos es más exacto y suele ser 1 o 2 unidades más bajo que el realizado con métodos manuales.

Material

• Capilares., si es sangre capilar deben estar heparinizados .
• Plastilina
• Algodón o gasas.
• Una centrífuga de microhematocrito.
• Una regla milimetrada o un lector de microhematocrito.

 

Reactivos

• EDTA  tripotásico dispuesto en tubos.

Muestra

• Sangre capilar o venosa , si es venosa tiene que ir en tubos con EDTA

Técnica

1. La determinación ha de hacerse por duplicado.
2.  llenar cada capilar con sangre , hasta las 3/4 partes de su tamaño .
3. Limpiar el exterior de cada tubo con una gasa.
4. Sellar el extremo de cada tubo por donde ha entrado la sangre con plastilina.
5. Colocarlos de forma equilibrada en la centrífuga , los bordes tapados hacia afuera
6. centrifugar los tubos 5 min.

 

 Lectura de resultados 

• Midiendo las columnas formadas en el interior de cada tubo con una regla milimetrada y haciendo el porcentaje con una regla de 3.
• Mediante un lector de microhematocrito.

Entre los valores obtenidos con los dos tubos no debe haber una diferencia superior de 2% del mayor de ellos . Si es así se repite la determinación y si es inferior se da como valor final del HCT la media de ambos valores.
Si el valor es superior a 50 se repite el proceso alargando la centrifugacion a 10min.


Interpretación de los resultados 

 

• El valor normal del HCT está comprendido entre el 42 y el 47 % en mujeres y 45 y 52% en hombres 
• Un valor por debajo puede ser signo de anemia aunque puede ser falso debido a hemodilución.
• Un valor alto del HCT puede ser una poliglobulia aunque puede ser falso debido a la hemoconcentración.

 
 
  Hoja de trabajo

• ¿ Qué significa la franja roja que tienen algunos capilares ?
• Que van heparinizados 
• ¿ A qué fuerza relativa se centrifuga la sangre ?
• 1200g
• Si la medida de la columna de eritrocitos es de 20 mm y la columna total es de 50mm ¿ cuál es el valor del HCT?
• 40%
• Si con un capilar se obtiene un HCT de 45 y otro de 43 ¿ Cómo actuamos ?    
• informamos de esa media como valor final

PRACTICA XII : Visualización de una cámara de recuento ( )

Fundamento


Material necesario

• Un microscopio
• Una cámara de recuento con retículo de Nevauer mejorado

 



Procedimiento

1. Observar con el microscopio el retículo de la cámara de recuento : 

• Primero , con el objetivo de 4x
• Luego, con el objetivo de 10x
• Después, con el objetivo de 40x

2 Enfocar , con el objetivo de 10x, uno de los cuadrados grandes situados en las cuatro esquinas del retículo.
Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande periférico :
Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3mm, calcular :

• La longitud de los lados de un cuadrado periférico :  1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos englobados en un cuadrado grande periférico : 0.25mm

 




Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendiudo entre el retículo y el cubre es de 0.1mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de :

• El retículo entero : V=0.9 V= LxLxh = 3x3 x 0.1 = 0.9 mm3
• Un cuadrado grande periférico =  v = 0.1 v = L x H x H x h = 1 x 1 x 0.1 = 0.1 mm3
• Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande periférico = v = L x h x h x h x h = 0.25 x 0.25 x 0.1

 3 Enfocar con el objetivo de 10x , el cuadrado grande central.
  contar  el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande central : 16
  contar el número de cuadrados pequeños englobados en uno de los cuadrados medianos : 1cuadro

Teniendo en cuenta que la longititud de cada uno de los lados del retículo es de 3mm , calcular :

• La longitud de los lados del cuadrado grande central : 0.25mm
• la longitud de los cuadrados pequeños contenidos en uno de esos cuadrados medianos : 0.0625m

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0.1mm , calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada a nivel de :

• El cuadrado grande central v = l x l x h = 1x1 x 0.1 = 0.1 mm3
• El cuadrado mediano englobado en el cuadrado grande central v = l x l x h  

     
     

PRACTICA XXVII : ( 1 - 12 - 14 )

PRACTICA XXI : Detección de los cuerpos de Heinz ( 28 - 11 - 14 )

Fundamento

• Los precipitados intraeritrocitarios de Hb ( hemoglobina ) desnaturalizada se tiñen con el cristal violeta y adquieren el aspecto de peuqeñas granulaciones  o cuerpos de Heinz

   


Material necesario

• Un tubo de ensayo
• 2 pipetas graduadas ( 1cc) = ( 1ml)
• Una pipeta pasteur
• Un baño de agua
• 2 portaobjetos
• Un microscopio

Reactivos

• Colorante ( cristal violeta ) preparado así :

1. Mezclar 20g de cristal violeta con 80 cc de suero fisiológico y 20 cc de agua destilada
2. Agitar la mezcla durante 5 min 
3. Filtramos la disolución 
4. Añadir al líquido filtrado 82 cc de suero fisiológico y 18 cc de agua destilada
5. Se mantiene a temperatura ambiente

• Líquido de inmersión

 

Muestra 

•  Sangre total

 


Técnica

1. 
   
2. Mezclar en un tubo de ensayo volúmenes iguales de la solución cristal violeta y de la sangre problema (1:1)
3. Incubar la mezcla a 37º durante 5 min.
4. Hacer una extensión fina de la mezcla 
5. Dejar secar la extensión 
6. Observar al microscopio con el objetivo de inmersión

 


Lectura de los resultados

• Los cuerpos de Heinz se ven teñidos de color violeta , que son granulaciones en la periferia de los glóbulos rojos

 

Hoja de trabajo

• ¿ Cuál es el colorante usado para teñir los cuerpos de Heinz ?
• Cristal violeta

• ¿De qué color son los cuerpos de heinz teñidos ?
• Púrpura

• ¿ Dónde se localizan los cuerpos de Heinz ?
• En la periferia de los hemtíes