Fundamento
- Para el recuento en cámara de plaquetas , se diluye la sangre problema en un líquido apropiado y , posteriormente se se deposita en la cámara de recuento , donde se cuentan las células presentes en algunos de los cuadrados de los retículos.
Material necesario
- Un tubo de ensayo preferentemente de plástico .
- Una pipeta diluidora de thoma ,para recuento de glóbulos rojos .
- Un tubo de goma con boquilla , adaptable a la pipeta diluidora .
- Gasas .
- Una cámara de reccuento , con un retículo tipo Nevauer mejorado .
- Un cubreobjetos .
- Un microscopio ( preferentemente de contraste de fases ) .
- Una placa de petri .
- Papel de filtro .
Reactivos
- Agua destilada
- Líquido de dilución . Hay varias soluciones que pueden emplearse para el recuento de trombocitos .
- En esta práctica se recomienda el uso de líquido de dilución suministrado por los laboratorios Spinreact.
- Este líquido rompe los hematíes , evita la agregación de las plaquetas entre si , y su adhesión a otros elementos , y facilita la visualización de las plaquetas al hacrlas refringentes .
Muestra
- Sangre capilar o sangre venosa recogida recientemente y recogida en un tubo con EDTA - K3
Técnica
1 . Verter en un tubo de ensayo , el volumen necesario de líquido de dilución para efectuar los ensayos requeridos ( aprox. 1 ml para cada determinación ) .
El volumen de líquido de dilución sobrante no ha de ser reintegrado al frasco donde estaba envasado , para no contaminar el resto de líquido de dilución .
2 . Con una pipeta diluidora de Thoma , aspirar la muestra de sangre , adecuadamente homogeneizada hasta la señal de 1 .
3 . Limpiar con una gasa la sangre adherida al exterior de la pipeta .
4 . Aspirar el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta .
5 . Agitar la pipeta , con movimientos de suave inversión ( 5 min.aprox.) .
6 . Desechar las primeras 5 gotas de dilución que salen de la pipeta .
7 . Cargar , correctamente , una cámara de recuento , con la dilución de sangre que queda en la pipeta .
8 . Colocar la cámara de recuento cargada , en el interior de una cámara húmeda .
9 . Dejar reposar la cámara de recuento cargada , durante 15min.
10 . Colocar la cámara de recuento sobre la platina del microscopio.
11 . Enfocar uno de los retículos de la cámara de recuento , con un objetivo de bajo aumento ( 10 x)
Con este objetivo se observa la homogeneidad de la distribución celular , de forma que , si esta no es satisfactoria , se efectua una nueva dilución de la muestra .
12 . Enfocar uno de los cuadrados grandes del retículo ( por ejemplo el central ) , con el objetivo de mediano aumento ( 40x ) .
13 . Contar la totalidad de plaquetas situadas en ese cuadrado grande .
Lectura de resultados
- Los trombocitos se observan como corpúsculos , redondeados u ovalados , de tamaño muy pequeño y muy refringentes .
- Hay que procurar no confundirlos con leucocitos , restos eritrocitarios , o con partículas de polvo .
Para calcular el número de plaquetas por mm3 de sangre , se aplica la siguiente fórmula :
PLT /mm3 = P x V x D = P x 100
PLT/mm3 = número de plaquetas por mm3 de sangre
P = número de plaquetas contadas en cuadrado grande
V = corrección de dilución ( 100 )
- Si la cifra de plaquetas obtenidas es , sospechosamente muy reducida , se efectúa con una dilución menor de la muestra y se cuentan las plaquetas contenidas en varios cuadrdos grandes .
- Si por el contrario , la cifra de plaquetas obtenida , es sospechosamente alta , se efectúa una dilución mayor de la muestra .
Esto implica un ajuste en los cálculos necesarios para obtener el PLT/mm3 y tiene como finalidad confirmar los resultados obtenidos .
Hoja de trabajo
- ¿ Qué tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas ?
- Se utililiza la pipeta diluidora de Thoma , para recuento de glóbulos rojos .
- ¿ Qué funciones desempeña el líquido de dilución empleado ?
- Rompe los hematíes , evita la agregación de las plaquetas entre sí , y su adhesión a otros elementos así como mejora la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes .
- ¿ Cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar un ensayo ?
- Aproximadamente 1 ml para cada determinación
- ¿Con qué se puede preparar una cámara húmeda ?
- Con una cámara de petri cerrada , y dentro de ella un papel de filtro humedecido
- ¿Con qué objetivo se cuentan las plaquetas ?
- Con el objetivo de 40x
- ¿Cómo se parecian los trombocitos en este recuento ?
- Se observan como corpúsculos redondeados , de tamaño muy pequeño y refringente
Resultados obtenidos
- Número de plaquetas contadas en un cuadrado grande
- Número de plaquetas por mm3 de sangre
( apuntes para repasar ) recordatorio
Valoración de los resultados
-bajo
-normal
-alto
( nuestra propia policia del organismo , los leucocitos )
